Jak zrestartować kolumnę C18

Krok 1

Odłącz kolumnę C18 od strumienia przepływu i zastąp kolumnę w odwrotnym kierunku. Użycie rozpuszczalnika z powrotem przez kolumnę w przeciwnym kierunku spowoduje poluzowanie efektu pakowania, który zachodzi w czasie. Należy uważać, aby nie utracić dużej ilości materiału opakowaniowego na końcu kolumny. Niektórzy producenci używają większej siatki na górnym końcu kolumny, więc gdy kierunek przepływu jest odwrócony, większa siatka znajduje się w dolnym położeniu. Ta metoda regeneracji nazywana jest płukaniem wstecznym. Aby zabezpieczyć się przed materiałem opakowaniowym wpływającym do detektora systemu i prawdopodobnie powodującym wtyczkę, system może działać bez podłączonego detektora i skierować strumień wyjściowy kolumny do odpadów.

Krok 2

Umieścić rurkę wlotową rozpuszczalnika w szeregu rozpuszczalników, aby eluować związki zatrzymane w kolumnie w kierunku odwrotnym. Stosowane szeregi rozpuszczalników różnią się charakterem hydrofilowym. Zmieniając rozpuszczalniki wymyślisz związki o równie zróżnicowanej hydrofilowości. Użyj kolejno 50 ml każdego z następujących rozpuszczalników: wody (jeśli używasz buforu w twoim rozpuszczalniku), metanolu, izopropanolu, dichlorometanu, heksanu, dichlorometanu i izopropanolu.

Krok 3

Ponownie podłącz kolumnę w prawidłowej orientacji i przeprowadź rozpuszczalnik przez system. Przed przepłukaniem kolumny należy użyć co najmniej 75 ml rozpuszczalnika. Wykonaj test iniekcyjny standardu, który wykonałeś, gdy kolumna była nowa i sprawdź wyniki. Zwróć szczególną uwagę na godziny maksymalnego zatrzymania, szczytowe kolejki i całkowity czas analizy. Stopień, w jakim te atrybuty są zbieżne z początkowym wykonaniem kolumny, gdy był nowy, wskaże stopień, w jakim kolumna została zregenerowana. Jeśli wyniki nie są satysfakcjonujące, wymień kolumnę na nową i wyrzuć starą kolumnę do kosza.